Набор реагентов для определения группы крови человека по антигенам эритроцитов АВ0. Рекомендации по применению

Назначение набора

ИзосероклоныТМ анти-А, анти-В, анти-АВ, анти-А1 диагностические жидкие предназначены для определения групповой принадлежности крови человека О(I), А(II), В(III), АВ(IV) по антигенам эритроцитов, включая дифференциальное выявление вариантов групповых антигенов А (А1, А2) и АВ (А1В, А2В), в прямой реакции гемагглютинации. По результатам использования указанного набора производится в том числе определение совместимости групп крови донора и реципиента. Изосероклоны являются эквивалентами цоликлонов и в связи с этим при определении групп крови к ним предъявляются те же требования, что и при определении группы крови цоликлонами.

Принцип действия набора для определения групп крови

Принцип действия реагентов, входящих в комплект, основывается на реакции гемагглютинации. Реакция наступает в результате специфического взаимодействия антигенов А, В, АВ или А1 эритроцитов человека с соответствующими ИзосероклонамиТМ анти-А, анти-В, анти-АВ или анти-А1.

Действующее начало реагентов анти-А, анти-В и анти-АВ - мышиные моноклональные антитела класса IgM, реагирующие соответственно с групповым антигеном А (ИзосероклонТМ анти-А), групповым антигеном В (ИзосероклонТМ анти-В) или АВ (ИзосероклонТМ анти-АВ) эритроцитов человека.

ИзосероклонТМ анти-А1 может быть представлен в наборе взаимозаменяемыми реагентами двух видов, действующее начало которых:

  • мышиные моноклональные антитела класса IgM , реагирующие с антигеном А1 эритроцитов человека;
  • растительный лектин (фитогемагглютинин), специфически реагирующий с антигеном А1 эритроцитов человека.

Компоненты комплекта для определения группы крови используют в прямой реакции агглютинации путем смешивания ИзосероклоновТМ с исследуемыми образцами крови (эритроцитов). Наступление агглютинации (положительная реакция) выражается в склеивании эритроцитов в отчетливо видимые агрегированные скопления клеток - агглютинаты, и просветлении поля реакции.

При отсутствии указанных антигенов на исследуемых эритроцитах агглютинация не появляется.

Состав набора

В состав набора входят следующие реагенты:

  • ИзосероклонТМ анти-А, готов к использованию - 3 флакона (по 5,0 мл) или 3 флакона (по 10 мл);
  • ИзосероклонТМ анти-В, готов к использованию - 3 флакона (по 5,0 мл) или 3 флакона (по 10 мл);
  • ИзосероклонТМ анти-АВ, готов к использованию - 3 флакона (по 5,0 мл) или 3 флакона (по 10 мл);
  • ИзосероклонТМ анти-А1, готов к использованию - 1 флакон (по 7,5 мл) или 1 флакон (по 15 мл).

Аналитические характеристики набора

Специфичность:

  • ИзосероклонТМ анти-А агглютинирует эритроциты, содержащие антигены А1 и А2, и не агглютинирует эритроциты групп О и В;
  • ИзосероклонТМ анти-В агглютинирует эритроциты, содержащие антиген В, и не агглютинирует эритроциты групп О и А;
  • ИзосероклонТМ анти-АВ агглютинирует эритроциты, содержащие антигены А1, А2, и В, и не агглютинирует эритроциты группы О;
  • ИзосероклонТМ анти-А1 агглютинирует эритроциты, содержащие антиген А1, и не агглютинирует эритроциты групп А2, В и О;
  • ИзосероклонТМ анти-А, анти-В, анти-АВ и анти-А1 полностью моноспецифичны по своим иммунохимическим характеристикам и поэтому не вызывают неспецифической агглютинации эритроцитов человека.

Титр:

  • в реакции агглютинации на плоскости титр ИзосероклоновТМ анти-А, анти-В, анти-АВ составляет не менее 1:32; ИзосероклонаТМ анти-А1 - не менее 1:8.

Авидность:

  • время наступления агглютинации эритроцитов с соответствующими ИзосероклонамиТМ, включая определение слабо выраженных антигенов эритроцитов, обычно не превышает 30 сек.

Количество определений:

  • набор, в зависимости от его комплектации, рассчитан на проведение определений групповой принадлежности в 150 или 300 образцах крови.

Меры предосторожности

При работе с анализируемыми образцами крови следует использовать одноразовые резиновые или пластиковые перчатки, т.к. образцы крови человека необходимо рассматривать как потенциально инфицированный материал, способный длительное время сохранять и передавать ВИЧ, вирусы гепатита и др. возбудителей инфекций.

Анализируемые пробы

Определение производится в нативной крови, взятой в консервант; в крови, взятой без консерванта, в том числе взятой из пальца.

Срок хранения образцов крови, предназначенных для исследования - не более 3 суток при температуре от 2 до 8 °С.

Оборудование, материалы и реагенты

  • белые пластинки со смачиваемой поверхностью;
  • пипетки пастеровские вместимостью 5,0 мл;
  • стеклянные или пластмассовые палочки для перемешивания капель крови и реагентов;
  • физиологический раствор.

Проведение анализа

Определение групп крови с использованием моноклональных реагентов проводится по одной общей методике, что и при определении группы крови цоликлонами. Используется метод прямой реакции гемагглютинации на плоскости: на пластине или в планшете.

Определение производится в помещении с хорошим освещением при температуре от 15 до 25 °С.

Расход каждого реагента комплекта для определения группы крови на одно исследование составляет 0,1 мл.

Порядок проведения анализа

Необходимо промаркировать пластину или планшет, указав фамилию, имя, отчество исследуемого лица и специфичность реагентов (анти-А, анти-В, анти-АВ и анти-А1).

Нанести на плоскость по одной большой капле (около 0,1 мл) ИзосероклоновТМ анти-А, анти-В и анти-АВ.

Рядом с каждым реагентом нанести по одной маленькой (0,01 – 0,05 мл) капле исследуемой крови или эритроцитов.

Смешать отдельными чистыми стеклянными палочками каждую каплю исследуемой крови (эритроцитов) с соответствующим реагентом для определения группы.

Мягко покачивать пластину или планшет в течение 2,5 минут. Обычно четкая агглютинация наступает в первые секунды после смешивания, но при наличии слабых разновидностей антигенов А или В она может наступить позднее.

Наличие агглютинации свидетельствует о положительном результате - (+), а ее отсутствие - об отрицательном (-).

После завершения реакции агглютинации исследуемого образца крови (эритроцитов) с ИзосероклонамиТМ анти-А, анти-В и анти-АВ делают заключение о его принадлежности к группам О(I), А(II), В(III) или АВ(IV) (см. таблицу в п. 9. "Учет результатов".

В образцах крови (эритроцитов) с установленной группой А(II) или АВ(IV) следует провести дифференцировку на варианты групповых антигенов А1(II) и А2(II) или А1В(IV) и А2В(IV). Для этого к одной большой капле (0,1 мл) ИзосероклонаТМ анти-А1 необходимо добавить одну маленькую каплю (0,01 - 0,05 мл) исследуемой крови или эритроцитов.

Мягко покачивать пластину или планшет в течение 2 минут и затем провести дифференцировку между группами А1(II) и А2(II) или между А1В(IV) и А2В(IV) (см. таблицу в п. 9 "Учет результатов").*

Учет результатов

Оценка результатов реакции гемагглютинации с ИзосероклонамиТМ анти-А, анти-В, анти-АВ и анти-А1 представлена в таблице.

Результат реакции с ИзосероклонамиТМ Исследуемая кровь принадлежит к группе Результат реакции с ИзосероклономТМ Исследуемая кровь принадлежит к группе
Анти-А Анти-В Анти-АВ   Анти-А1  
- - - О(I)    
+ - + А(II): А1(II) или А2(II) + А1(II)
        - А2(II)
- + + В(III)    
+ + + АВ(IV): А1В(IV) или А2В(IV) + А1В(IV)
        - А2В(IV)

Примечание:
(+) - наличие агглютинации;
(-) - отсутствие агглютинации;
(закрашенные ячейки) - окончательное заключение о групповой принадлежности

В случае положительной реакции исследуемого образца крови со всеми четырьмя реагентами (ИзосероклонамиТМ анти-А, анти-В, анти-АВ и анти-А1), т.е. при установлении группы крови А1В(IV), необходимо убедиться, что полученный результат не является следствием спонтанной аутоагглютинации эритроцитов. Для этого проводят дополнительное контрольное исследование данного образца крови с 0,9 % раствором хлористого натрия (физиологическим раствором). На плоскости смешивают одну каплю (0,01 - 0,05 мл) исследуемой крови с каплей (0,1 мл) физиологического раствора. При отсутствии агглютинации в контрольном исследовании делают заключение о принадлежности крови к группе А1В(IV). При наличии спонтанной агглютинации (положительная реакция в контрольном исследовании крови с физиологическим раствором) рекомендуется повторить определение группы крови, используя отмытые эритроциты данного образца крови.

Результаты данного исследования могут использоваться в том числе для определения совместимости групп крови доноров и реципиентов при необходимости переливания крови.

Условия хранения и эксплуатации набора

Срок хранения реагентов - два года при температуре от 2 до 8 °С. Вскрытые флаконы с реагентами можно хранить при температуре от 2 до 8 °С в закрытом виде в течение шести месяцев.

По вопросам, касающимся качества набора, следует обращаться в Фонд развития медицинских и биологических технологий "МеДиКлон" по адресу: 190108, Санкт-Петербург, Рижский пр., д. 2, тел.: 8 (812) 325-66-19; или в Институт государственного контроля лекарственных средств ФГУ "НЦ ЭСМП" Росздравнадзора, по адресу: 117246, г. Москва, Научный проезд, д.14а, тел.: 8 (495) 120-60-95, 120-60-96.

 
 

*Внимание! Оценку результатов исследований следует проводить не позднее 2 мин. после начала реакции, т.к. ИзосероклоныТМ анти-А1 в реакции с эритроцитами группы А2(II) могут давать слабовыраженную агглютинацию после истечения рекомендуемого (до 2 мин.) времени наблюдения.