Порядок проведения анализа на наличие резус-фактора (RhD) с использованием реагента анти-D IgG

Изосероклонтм анти-D IgG, применяемый для анализа крови на наличие резус-фактора (RhD), может быть использован в непрямом антиглобулиновом тесте (непрямая проба Кумбса) или в реакции конглютинации с желатином в пробирочном тесте.

Непрямой антиглобулиновый тест (непрямая проба Кумбса)

Приготовьте образец исследуемой крови.

Для этого в пробирку внесите примерно 0,25 мл крови, три раза отмойте эритроциты в физиологическом растворе.

Ресуспендируйте осадок в 2 - 3 мл физиологического раствора или в растворе с низкой ионной силой – LISS для получения 2 – 5 % суспензии исследуемых эритроцитов.

Промаркируйте чистую пробирку, указав фамилию, имя, отчество исследуемого лица.

Внесите в пробирку одну каплю 2 – 5 % взвеси исследуемых эритроцитов.

Добавьте одну каплю (~ 0,1 мл) реагента для анализа крови на резус-фактор Изосероклонтм анти-D IgG.

Инкубируйте смесь в термостате или на водяной бане при температуре + 37 °С в течение 10 - 15 мин.

Добавьте в пробирку 5 мл физиологического раствора. Центрифугируйте пробирку со смесью в течение 2 - 5 мин. при 2000 об./мин. Полностью удалите физиологический раствор.

Добавьте одну каплю (~ 0,1 мл) антиглобулинового реагента к осадку эритроцитов и тщательно перемешайте.

Центрифугируйте пробирку с исследуемым образцом эритроцитов в течение 15 - 20 секунд при 2000 об./мин.

Осторожно ресуспендируйте осадок эритроцитов и визуально определите наличие или отсутствие агглютинации. При положительном результате на дне пробирки образуется один или несколько крупных агглютинатов на фоне прозрачного раствора.

Менее выраженная агглютинация свидетельствует о наличии на эритроцитах вариантов антигена D (DI - DVII). В случае отрицательного результата анализа на резус-фактор осадок легко разбивается и представляет собой непрозрачную суспензию эритроцитов.

Реакция конглютинации с желатином в пробирочном тесте

Промаркируйте чистую пробирку, указав фамилию, имя, отчество исследуемого лица.

В пробирку внесите одну каплю (0,05 - 0,1 мл) исследуемой крови. Добавьте две капли по 0,1 мл 10 % желатина, предварительно прогретого в термостате или на водяной бане при температуре + 48 °С до разжижения. Добавьте две капли по 0,1 мл реагента для анализа на наличие резус-фактора Изосероклонтм анти-D IgG, тщательно перемешайте суспензию.

Инкубируйте в течение 10 - 15 мин. на водяной бане или 30 мин. в термостате при температуре + 48 °С. Добавьте в пробирку 5 мл физиологического раствора, закройте её резиновой пробкой, а затем осторожно переверните пробирку 1 - 2 раза.

Результаты реакции оцените визуально. При положительном результате анализа крови на резус-фактор образуется один или несколько крупных агглютинатов на фоне прозрачного физиологического раствора. Менее выраженная агглютинация свидетельствует о наличии на эритроцитах вариантов антигена D (DI - DVII). При отрицательном результате образуется равномерная, непрозрачная суспензия эритроцитов.

Контроль специфичности

Для контроля специфичности (вне зависимости от используемой методики) с каждой серией анализируемых образцов крови следует выполнять контрольные исследования Изосероклонатм анти-D IgG со стандартными D-положительными и D-отрицательными эритроцитами. Результаты считают действительными лишь в случае правильной реакции Изосероклонатм анти-D IgG со стандартными эритроцитами.